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ATCC細胞篩選時的常用技術(shù)講解

發(fā)布時間: 2021-09-14  點擊次數(shù): 1431次
   ATCC細胞的說明書中有關(guān)于細胞復蘇和傳代的詳細步驟。除說明書外,還有另一份重要文件-COA(Certificate of Analysis)。COA中包含具體批次信息,如每管細胞的數(shù)量,建議復蘇使用的培養(yǎng)基用量,已知細胞的傳代代次等重要信息。
  部分培養(yǎng)基如DMEM,各廠商提供產(chǎn)品雖然名稱相同,但成分也會有差異。為了保證細胞大的復蘇率和維持細胞特性,建議購買細胞的時候,同時購買ATCC細胞的培養(yǎng)基。
  篩選ATCC細胞株的兩種技術(shù)介紹:
  1.轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后,單克隆方法篩選穩(wěn)定細胞系
  對大多數(shù)細胞轉(zhuǎn)染效率較低。對于基因過表達,如果轉(zhuǎn)染效率達到40%,基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗,對轉(zhuǎn)染效率要求遠遠高于基因過表達,通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。
  另外,質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中,很快降解,無法滿足較長時間的檢測項目;質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低,穩(wěn)定細胞株構(gòu)建耗時耗力,且得率很低,往往需要挑取單克隆株。
  2.病毒感染篩選穩(wěn)定ATCC細胞株
  病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效,是目前主流的穩(wěn)定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株,由于其高效整合、高效轉(zhuǎn)錄、高效表達、宿主范圍廣,感染效率高,且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排,是制備穩(wěn)定細胞株的理想載體。

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